agxАндрология и генитальная хирургияAndrology and Genital Surgery2070-97812412-890210.17650/1726-9784-2021-22-1-52-61agx-474Research ArticleОРИГИНАЛЬНАЯ СТАТЬЯORIGINAL REPORTМетилирование гена SNRPN у мужчин с бесплодием при отсутствии мутаций в известных генах-кандидатах снижения фертильностиMethylation of the SNRPN gene in infertile men without mutations in common candidate genes for reduced fertilityhttps://orcid.org/0000-0001-9780-8708МихайленкоД. С.MikhaylenkoD. S.

Дмитрий Сергеевич Михайленко 

115522 Москва, ул. Москворечье, 1

119991 Москва, ул. Трубецкая, 8

Dmitry Sergeevich Mikhaylenko 

1 Moskvorech’e St., Moscow 115522

8 Trubetskaya St., Moscow 119991

dimserg@mail.ruСимоноваО. А.SimonovaО. A.

115522 Москва, ул. Москворечье, 1

1 Moskvorech’e St., Moscow 115522

Аль-АкелИ.El AkelI.

105425 Москва, ул. 3-я Парковая, 51, стр. 1

Bld. 1, 51 3rd Parkovaya St., Moscow 105425

СобольИ. Ю.SobolI. Yu.

105425 Москва, ул. 3-я Парковая, 51, стр. 1

Bld. 1, 51 3rd Parkovaya St., Moscow 105425

ЕдоянТ. А.EdoyanТ. A.

117997 Москва, ул. Островитянова, 1

1 Ostrovityanova St., Moscow 117997

https://orcid.org/0000-0001-7193-7413ЕфремовЕ. А.EfremovЕ. A.

105425 Москва, ул. 3-я Парковая, 51, стр. 1

Bld. 1, 51 3rd Parkovaya St., Moscow 105425

https://orcid.org/0000-0002-7857-6320КузнецоваЕ. Б.KuznetsovaE. B.

119991 Москва, ул. Трубецкая, 8

8 Trubetskaya St., Moscow 119991

https://orcid.org/0000-0002-2835-5992НемцоваМ. В.NemtsovaМ. V.

115522 Москва, ул. Москворечье, 1

119991 Москва, ул. Трубецкая, 8

1 Moskvorech’e St., Moscow 115522

8 Trubetskaya St., Moscow 119991

ФГБНУ «Медико-генетический научный центр им. акад. Н.П. Бочкова»; ФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияN.P. Bochkov Research Centre for Medical Genetics; I.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Ministry of Health of RussiaRussian FederationФГБНУ «Медико-генетический научный центр им. акад. Н.П. Бочкова»РоссияN.P. Bochkov Research Centre for Medical GeneticsRussian FederationНаучно-исследовательский институт урологии и интервенционной радиологии им. Н.А. Лопаткина – филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава РоссииРоссияN.А. Lopatkin Scientific Research Institute of Urology and Interventional Radiology – branch of the National Medical Research Radiologiсal Center, Ministry of Health of RussiaRussian FederationФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава РоссииРоссияN.I. Pirogov Russian National Research Medical University, Ministry of Health of RussiaRussian FederationФГАОУ ВО Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)РоссияI.M. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University), Ministry of Health of RussiaRussian Federation2021210420212215261Copyright © Михайленко Д.С., Симонова О.А., Аль-Акел И., Соболь И.Ю., Едоян Т.А., Ефремов Е.А., Кузнецова Е.Б., Немцова М.В., 20212021Михайленко Д.С., Симонова О.А., Аль-Акел И., Соболь И.Ю., Едоян Т.А., Ефремов Е.А., Кузнецова Е.Б., Немцова М.В.Mikhaylenko D.S., Simonova О.A., El Akel I., Sobol I.Y., Edoyan Т.A., Efremov Е.A., Kuznetsova E.B., Nemtsova М.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://agx.elpub.ru/jour/article/view/474Введение

Введение. Бесплодие у мужчин представляет собой актуальную проблему современной андрологии и встречается в 45 % бесплодных браков. Часть случаев бесплодия у мужчин обусловлена генетическими причинами: точковыми мутациями при ряде моногенных заболеваний, делециями локуса AZF или сочетанием мутаций CFTR; сниженная фертильность ассоциирована также с полиморфными вариантами генов AR и GSTT1/GSTM1. Вместе с тем публикуют все больше данных о роли эпигенетических механизмов в виде аберрантного метилирования и нарушения импринтинга в патологии сперматогенеза.

Материалы и методы

Материалы и методы. В настоящей работе нами исследованы 49 образцов ДНК, полученных из образцов спермы неродственных мужчин с бесплодием, с помощью полимеразной цепной реакции, фрагментного анализа и секвенирования.

Результаты

Результаты. Из первоначальной когорты исключены 5 пациентов: 1 – с длиной повтора 29 (CAG) в экзоне 1 AR, 3 – с нулевыми генотипами по генам GSTT1 и GSTM1, 1 – компаунд гетерозигота delF508/5T по гену CFTR. После этого с помощью метилспецифической полимеразной цепной реакции и бисульфитного секвенирования было определено метилирование импринтированного гена SNRPN. Показано, что аберрантное метилирование SNRPN встречается в 11,4 % случаев мужского бесплодия. Суммарно молекулярно-генетические и эпигенетические нарушения были выявлены у 20 % пациентов.

Заключение

Заключение. Полученные данные демонстрируют значительную долю (эпи)генетических нарушений в гетерогенной выборке мужчин со сниженной фертильностью. 

Introduction

Introduction. Male infertility is a common problem in andrology and occurs in 45 % of infertile couples. Some cases of male infertility caused by genetic reasons: point mutations at some monogenic diseases, AZF deletions or a CFTR mutation compounds; reduced fertility is also associated with polymorphic variants of the genes AR and GSTT1/GSTM1. At the same time, increasing amount of data are being published about the role of epigenetic mechanisms (aberrant methylation and imprinting alterations) in defective spermatogenesis.

Materials and methods

Materials and methods. We have studied 49 sperm samples obtained from unrelated infertile men using polymerase chain reaction, fragment analysis, and sequencing.

Results

Results. Five patients were excluded from the initial cohort: one with a repeat length of 29 (CAG) in the first exon  of the AR, three with null genotypes in the GSTT1 and GSTM1, and one with the delF508/5T heterozygous compound in the CFTR. Thereafter, methylation of the imprinted gene SNRPN was determined using methyl-specific polymerase chain reaction and bisulfite sequencing. Aberrant SNRPN methylation was detected in 11.4 % of male infertility samples. In total, molecular genetic and epigenetic alterations were determined in 20 % of patients.

Conclusions

Conclusions. Obtained data demonstrate a significant proportion of (epi)genetic disorders in a heterogeneous cohort of men with reduced fertility. 

мужское бесплодиеметилирование ДНКимпринтингделеции AZFмутации CFTRполиморфизмы ARGSTM1 и GSTT1секвенированиеПЦРmale infertilityDNA methylationimprintingAZF deletionsCFTR mutationspolymorphisms of the ARGSTM1 and GSTT1sequencingPCRReferencesЧалый М.Е., Ахвледиани Н.Д., Харчилава Р.Р. Мужское бесплодие. Урология 2017;2-S2:4–19.. DOI:10.18565/urol.2017.2supplement.4-19. PMID: 28845928.Chalyi M.E., Akhvlediani N.D., Kharchilava R.R. Male infertility. Urologiya = Urology 2017;2-S2:4–19. (in Russ.). DOI:10.18565/urol.2017.2supplement.4-19. PMID: 28845928.Kleisch S. Diagnosis of male infertility: diagnostic work-up of the infertile man. Eur Urol Suppl 2014;13:73–82. DOI:10.1016/j.eursup.2014.08.002.Kleisch S. Diagnosis of male infertility: diagnostic work-up of the infertile man. Eur Urol Suppl 2014;13:73–82. DOI:10.1016/j.eursup.2014.08.002.Krausz C., Riera-Escamilla A. Genetics of male infertility. Nat Rev Urol 2018; 15(6):369–84. DOI:10.1038/s41585018-0003-3. PMID: 29622783.Krausz C., Riera-Escamilla A. Genetics of male infertility. Nat Rev Urol 2018; 15(6):369–84. DOI:10.1038/s41585018-0003-3. PMID: 29622783.Colaco S., Modi D. Genetics of the human Y chromosome and its association with male infertility. Reprod Biol Endocrinol 2018;16(1):14. DOI:10.1186/s12958-018-0330-5. PMID: 29454353.Colaco S., Modi D. Genetics of the human Y chromosome and its association with male infertility. Reprod Biol Endocrinol 2018;16(1):14. DOI:10.1186/s12958-018-0330-5. PMID: 29454353.Souza D.A., Faucz F.R., Pereira-Ferrari L. et al. Congenital bilateral absence of the vas deferens as an atypical form of cystic fibrosis: reproductive implications and genetic counseling. Andrology 2018;6(1):127–35. DOI:10.1111/andr.12450. PMID: 29216686.Souza D.A., Faucz F.R., Pereira-Ferrari L. et al. Congenital bilateral absence of the vas deferens as an atypical form of cystic fibrosis: reproductive implications and genetic counseling. Andrology 2018;6(1):127–35. DOI:10.1111/andr.12450. PMID: 29216686.Xiao F., Lan A., Lin Z. et al. Impact of CAG repeat length in the androgen receptor gene on male infertility – a meta-analysis. Reprod BioMed Online 2016;33(1):39–49. DOI:10.1016/j. rbmo.2016.03.012. PMID: 27157932.Xiao F., Lan A., Lin Z. et al. Impact of CAG repeat length in the androgen receptor gene on male infertility – a meta-analysis. Reprod BioMed Online 2016;33(1):39–49. DOI:10.1016/j. rbmo.2016.03.012. PMID: 27157932.Глыбочко П.В., Аляев Ю.Г., Чалый М.Е., Усачёва О.А. Влияние полиморфизма генов глутатионтрансфераз М1 и Т1 на андрогенный статус и качество эякулята после оперативного лечения варикоцеле. Андрология и генитальная хирургия 2013;1:23–6. DOI: 10.17650/2070-9781-2013-1-23-26.Glybochko P.V., Alyaev Y.G., Chalyy M.E., Usacheva O.A. Influence of the glutation S-transferases T1 and M1 gene polymorphisms on androgenic status and semen quality after surgical treatment of varicocele. Andrologiya i genital’naya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2013;14(1):23–6. (In Russ.). DOI: 10.17650/2070-9781-2013-1-23-26.Wu W., Lu J., Tang Q. et al. GSTM1 and GSTT1 null polymorphisms and male infertility risk: an updated meta-analysis encompassing 6934 subjects. Sci Rep 2013;3:2258. DOI:10.1038/srep02258. PMID: 23877133.Wu W., Lu J., Tang Q. et al. GSTM1 and GSTT1 null polymorphisms and male infertility risk: an updated meta-analysis encompassing 6934 subjects. Sci Rep 2013;3:2258. DOI:10.1038/srep02258. PMID: 23877133.Эпигенетика. Под. ред. Эллис С.Д., Дженювейн Т., Рейнберг Д., Капаррос М.Л. Пер.с англ. М.: Техносфера, 2010. 496 с.Epigenetics. Ed. by C.D. Allis, T. Jenuwein, D. Reinberg, M.L. Caparros. M.: Technosfera, 2010. 496 pp. (in Russ.).Наследственные болезни. Национальное руководство. Под ред. Бочкова Н.П. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. 936 с.Hereditary diseases. National guideline. Ed. by N.P. Bochkov. M.: GEOTARMedia, 2013. 936 pp. (in Russ.).Santi D., De Vincentis S., Magnani E., Spaggiari G. Impairment of sperm DNA methylation in male infertility: a metaanalytic study. Andrology 2017;5(4):695– 703. DOI:10.1111/andr.12379. PMID: 28718528.Santi D., De Vincentis S., Magnani E., Spaggiari G. Impairment of sperm DNA methylation in male infertility: a metaanalytic study. Andrology 2017;5(4):695– 703. DOI:10.1111/andr.12379. PMID: 28718528.Peng H., Zhao P., Liu J. et al. Novel epigenomic biomarkers of male infertility identified by methylation patterns of CpG sites within imprinting control regions of H19 and SNRPN genes. OMICS 2018;22(5):354–64. DOI:10.1089/omi.2018.0019. PMID: 29708855.Peng H., Zhao P., Liu J. et al. Novel epigenomic biomarkers of male infertility identified by methylation patterns of CpG sites within imprinting control regions of H19 and SNRPN genes. OMICS 2018;22(5):354–64. DOI:10.1089/omi.2018.0019. PMID: 29708855.Cheon C.K. Genetics of Prader-Willi syndrome and Prader-Will-Like syndrome. Ann Pediatr Endocrinol Metab 2016;21(3):126–35. DOI:10.6065/ apem.2016.21.3.126. PMID: 27777904.Cheon C.K. Genetics of Prader-Willi syndrome and Prader-Will-Like syndrome. Ann Pediatr Endocrinol Metab 2016;21(3):126–35. DOI:10.6065/ apem.2016.21.3.126. PMID: 27777904.Михайленко Д.С., Соболь И.Ю., Сафронова Н.Ю. и др. Частота выявления делеций AZF, мутаций CFTR и длинных аллелей CAG-повтора AR при первичной лабораторной диагностике в гетерогенной группе пациентов с мужским бесплодием. Урология 2019;3:101–7. DOI:10.18565/ urology.2019.3.101-107. PMID: 31356021.Mikhaylenko D.S., Sobol I.Y., Safronova N.Y. et al. The incidence of AZF deletions, CFTR mutations and long alleles of the AR CAG repeats during the primary laboratory diagnostics in a heterogeneous group of infertily men. Urologiya = Urology 2019;3:101–7. (in Russ.). DOI:10.18565/ urology.2019.3.101-107. PMID: 31356021.Nailwal M., Chauhan J.B. Azoospermia factor C subregion of the Y chromosome. J Hum Reprod Sci 2017;10(4):256–60. DOI:10.4103/jhrs.JHRS_16_17. PMID: 29430151.Nailwal M., Chauhan J.B. Azoospermia factor C subregion of the Y chromosome. J Hum Reprod Sci 2017;10(4):256–60. DOI:10.4103/jhrs.JHRS_16_17. PMID: 29430151.Аксельрод Э.В., Миронов К.О., Михайленко Д.С. и др. Разработка и апробация методики на основе мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для определения клинически значимых микроделеций в Y-хромосоме. Клиническая лабораторная диагностика 2018;63(2):124–8. DOI: 10.18821/0869-2084-2018-63-2124-128. PMID: 30672679.Akselrod E.V., Mironov K.O., Mikhailenko D.S. et al. The development and approbation of methodology on the basis of multiplex polymerase chain reaction in real-time to determine clinically significant microdeletion in Y-chromosome. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika = Klin Lab Diagn 2018;63(2):124–8. (in Russ.). DOI: 10.18821/0869-2084-2018-63-2124-128. PMID: 30672679.Абрамов Д.Д., Кадочникова В.В., Якимова Е.Г. и др. Высокая частота носительства в российской популяции мутаций гена CFTR, ассоциированных с муковисцидозом, и мутаций гена PAH, ассоциированных с фенилкетонурией. Вестник РГМУ 2015;4:32–5.Abramov D.D., Kadochnikova V.V., Yakimova E.G. et al. High carrier frequency of CFTR gene mutations associated with cystic fibrosis, and PAH gene mutations associated with phenylketonuria in Russian population. Vestnik RGMU = Bulletin of RSMU 2015;4:32–5. (in Russ.).Chernykh V.B., Stepanova A.A., Beskorovainaya T.S. et al. The frequency and spectrum of mutations and the IVS8-T polymorphism of the CFTR gene in Russian infertile men. Russian Journal of Genetics 2010;46(6):750–57. PMID: 20734777.Chernykh V.B., Stepanova A.A., Beskorovainaya T.S. et al. The frequency and spectrum of mutations and the IVS8-T polymorphism of the CFTR gene in Russian infertile men. Russian Journal of Genetics 2010;46(6):750–57. PMID: 20734777.Yang X., Sun Q., Yuan P. et al. Novel mutations and polymorphisms in the CFTR gene associated with three subtypes of congenital absence of vas deferens. Fertil Steril 2015;104(5):1268–75.e2. DOI:10.1016/j.fertnstert.2015.07.1143. PMID: 26277102.Yang X., Sun Q., Yuan P. et al. Novel mutations and polymorphisms in the CFTR gene associated with three subtypes of congenital absence of vas deferens. Fertil Steril 2015;104(5):1268–75.e2. DOI:10.1016/j.fertnstert.2015.07.1143. PMID: 26277102.Gelfi C., Perego M., Righetti P.G. et al. Rapid capillary zone electrophoresis in isoelectric histidine buffer: high resolution of the poly-T tract allelic variants in intron 8 of the CFTR gene. Clin Chem 1998;44(5):906–13. PMID: 9590360.Gelfi C., Perego M., Righetti P.G. et al. Rapid capillary zone electrophoresis in isoelectric histidine buffer: high resolution of the poly-T tract allelic variants in intron 8 of the CFTR gene. Clin Chem 1998;44(5):906–13. PMID: 9590360.Курашова Н.А., Беляева Е.В., Ершова О.А. и др. Ассоциация полиморфизма генов GSTT1, GSTM1 с бесплодием у мужчин. Урология 2017;6: 38–42. DOI:10.18565/urology.2017.6.38-42. PMID: 29376593.Kurashova N.A., Belyaeva E.V., Ershova O.A. et al. Association of polymorphism of GSTT1 and GSTM1 genes with infertility in men. Urologiya = Urology 2017;6:38–42. (in Russ.). DOI:10.18565/urology.2017.6.38-42. PMID: 29376593.Черных В.Б., Руднева С.А., Сорокина Т.М. и др. Влияние CAG-полиморфизма гена андрогенового рецептора (AR) на сперматогенез у мужчин с бесплодием. Андрология и генитальная хирургия 2015;16(4):55–61. DOI:10.17650/2070-9781-2015-16-4-55-61.Chernykh V.B., Rudneva S.A., Sorokina T.M. et al. An influence of androgen receptor (AR) gene СAGpolymorphism on spermatogenesis in infertile men. Andrologiya i genital’naya khirurgiya = Andrology and Genital Surgery 2015;16(4):55–61. (in Russ.). DOI:10.17650/2070-9781-2015-16-4-55-61.Михайленко Д.С., Бабенко О.В., Кириллова Е.А. и др. Комплексный молекулярно-генетический анализ микроделеций области AZF, мутаций гена CFTR и длины CAG-повтора гена AR у мужчин с бесплодием. Проблемы репродукции. 2005;11(6):52–5.Mikhaylenko D.S., Babenko O.V., Kirillova E.A. et al. Complex molecular genetic analysis of the AZF microdeletions, CFTR mutations, and CAG-repeat length of the AR gene in infertile men. Problemy reproduktsii = Problems of reproduction. 2005;11(6):52–5 (in Russ.).Canale D., Caglieresi C., Moschini C. et al. Androgen receptor polymorphism (CAG repeats) and androgenicity. Clin Endocrinol (Oxf) 2005;63(3):356–61. DOI:10.1111/j.1365-2265.2005.02354.x. PMID: 16117826.Canale D., Caglieresi C., Moschini C. et al. Androgen receptor polymorphism (CAG repeats) and androgenicity. Clin Endocrinol (Oxf) 2005;63(3):356–61. DOI:10.1111/j.1365-2265.2005.02354.x. PMID: 16117826.Katagiri Y., Neri Q.V., Takeuchi T. et al. Androgen receptor CAG polymorphism (Xq11-12) status and human spermatogenesis: a prospective analysis of infertile males and their offspring conceived by intracytoplasmic sperm injection. Int J Mol Med 2006;18(3):405–13. PMID:16865224.Katagiri Y., Neri Q.V., Takeuchi T. et al. Androgen receptor CAG polymorphism (Xq11-12) status and human spermatogenesis: a prospective analysis of infertile males and their offspring conceived by intracytoplasmic sperm injection. Int J Mol Med 2006;18(3):405–13. PMID:16865224.He W., Sun Υ., Zhang S. et al. Profiling the DNA methylation patterns of imprinted genes in abnormal semen samples by next-generation bisulfite sequencing. J Assist Reprod Genet 2020;37(9):2211–21. DOI:10.1007/s10815-020-01839-x. PMID: 32572674.He W., Sun Υ., Zhang S. et al. Profiling the DNA methylation patterns of imprinted genes in abnormal semen samples by next-generation bisulfite sequencing. J Assist Reprod Genet 2020;37(9):2211–21. DOI:10.1007/s10815-020-01839-x. PMID: 32572674.El Hajj N., Zechner U., Schneider E. et al. Methylation status of imprinted genes and repetitive elements in sperm DNA from infertile males. Sex Dev 2011;5(2):60–9. DOI:10.1159/000323806. PMID: 21293114.El Hajj N., Zechner U., Schneider E. et al. Methylation status of imprinted genes and repetitive elements in sperm DNA from infertile males. Sex Dev 2011;5(2):60–9. DOI:10.1159/000323806. PMID: 21293114.Camprubi C., Pladevall M., Grossmann M. et al. Semen samples showing an increased rate of spermatozoa with imprinting errors have a negligible effect in the outcome of assisted reproduction techniques. Epigenetics 2012;7(10):1115–24. DOI:10.4161/epi.21743. PMID: 22885410.Camprubi C., Pladevall M., Grossmann M. et al. Semen samples showing an increased rate of spermatozoa with imprinting errors have a negligible effect in the outcome of assisted reproduction techniques. Epigenetics 2012;7(10):1115–24. DOI:10.4161/epi.21743. PMID: 22885410.Lou H., Le F., Hu M. et al. Aberrant DNA methylation of IGF2-H19 locus in human fetus and in spermatozoa from assisted reproductive technologies. Reprod Sci 2019;26(7):997–1004. DOI:10.1177/1933719118802052. PMID: 30270743.Lou H., Le F., Hu M. et al. Aberrant DNA methylation of IGF2-H19 locus in human fetus and in spermatozoa from assisted reproductive technologies. Reprod Sci 2019;26(7):997–1004. DOI:10.1177/1933719118802052. PMID: 30270743.Ni W., Pan C., Pan Q. et al. Methylation levels of IGF2 and KCNQ1 in spermatozoa from infertile men are associated with sperm DNA damage. Andrologia 2019;51(5):e13239. DOI: 10.1111/and.13239. PMID: 30680773.Ni W., Pan C., Pan Q. et al. Methylation levels of IGF2 and KCNQ1 in spermatozoa from infertile men are associated with sperm DNA damage. Andrologia 2019;51(5):e13239. DOI: 10.1111/and.13239. PMID: 30680773.Dong H., Wang Y., Zou Z. et al. Abnormal methylation of imprinted genes and cigarette smoking: assessment of their association with the risk of male infertility. Reprod Sci 2017;24(1):114–23. DOI:10.1177/1933719116650755. PMID: 27247128.Dong H., Wang Y., Zou Z. et al. Abnormal methylation of imprinted genes and cigarette smoking: assessment of their association with the risk of male infertility. Reprod Sci 2017;24(1):114–23. DOI:10.1177/1933719116650755. PMID: 27247128.Hammoud S.S., Purwar J., Pflueger C. et al. Alterations in sperm DNA methylation patterns at imprinted loci in two classes of infertility. Fertil Steril 2010;94(5):1728–33. DOI:10.1016/j.fertnstert.2009.09.010. PMID: 19880108.Hammoud S.S., Purwar J., Pflueger C. et al. Alterations in sperm DNA methylation patterns at imprinted loci in two classes of infertility. Fertil Steril 2010;94(5):1728–33. DOI:10.1016/j.fertnstert.2009.09.010. PMID: 19880108.Laqqan M., Hammadeh M.E. Alterations in DNA methylation patterns and gene expression in spermatozoa of subfertile males. Andrologia 2018;50(3). DOI:10.1111/and.12934. PMID: 29230837.Laqqan M., Hammadeh M.E. Alterations in DNA methylation patterns and gene expression in spermatozoa of subfertile males. Andrologia 2018;50(3). DOI:10.1111/and.12934. PMID: 29230837.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.